Merck/ آلمان
نیتروسالیسیلیک اسید
۳,۵-nitrosalicylic acid
جامد
Merck/ آلمان
بوین سرم آلبومین
Bovine Serum Albumin
جامد
Merck/ آلمان
سدیم پتاسیم تارتارات
Sodium potassium tartrate
جامد
Merck/ آلمان
۳-۵– سوبسترا
سوبسترای مورد استفاده در این پروژه باگاس نیشکر بود (شکل ۳-۲). این ماده از کارخانه آبزیان شمال (بابل) تهیه و پیش از استفاده چندین بار با آب مقطر شستشو گردید. سپس در دمای ۸۰ درجه سانتی گراد در آون قرار داده شد. پس از گذشت ۲۴ ساعت ساییده و به ذرات ریزتر تبدیل شد و تا زمان استفاده در کیسه پلاستیکی در دمای محیط نگه داری گردید.
شکل ۳-۲: باگاس مورد استفاده در آزمایشگاه
۳-۶– میکروارگانیسم و محیط کشت
همانطور که گفته شد برای انجام فرایند تخمیر ابتدا باید میکروارگانیسم و محیط کشت آماده شود. بدین منظور میکروارگانیسم مورد نظر تهیه شده و در محیط کشت مناسب آن کشت داده شد که در ادامه به تفصیل شرح داده شده است.
۳-۶-۱– میکروارگانیسم
با توجه به مطالعات انجام شده بر روی فرآیندهای تخمیر حالت جامد، مخمرها میکروارگانیسم های مناسبی برای شرایط کم آب با رطوبت محدود هستند و به دلیل مزایایی که پیش تر ذکر گردید، از این نوع میکروارگانیسم ها در این پروژه استفاده شد.از میان مخمرها گونه ساکرومایسیس سرویسیه به دلیل کاربردی بودن در فرآیندهای بیولوژیکی و قابل پذیرش بودن برای مردم به دلیل سابقه طولانی در فرآیندهای تخمیری انتخاب شد.میکروارگانیسم مورد استفاده (PTCC 24860)Saccharomyces cerevisiae بوده که از سازمان ملی پژوهش های علمی و صنعتی ایران[۶۵] تهیه گردید.
۳-۶-۲– محیط کشت
برای رشد و نگهداری میکروارگانیسم ها باید آن ها را در محیط های مناسب از نظر شرایط فیزیکی و شیمیایی کشت داد. برای تهیه محیط کشت مناسب هر فرایند تخمیری، بررسی دقیق جداگانه لازم است، اما برخی نیازهای اساسی اولیه برای تمام محیط های کشت مشترک است. تمام میکروارگانیسم ها به آب، منبع انرژی، کربن، نیتروژن و عناصر معدنی نیاز دارند. در مقیاس آزمایشگاهی، طراحی محیط کشت متشکل از ترکیبات شیمیایی خالص نسبتاً ساده است. این محیط کشت برای رشد میکروارگانیسم مناسب بوده، اما ممکن است برای کاربردهای صنعتی مناسب نباشد. برای نگهداری میکروارگانیسم می توان از محیط کشت مایع و جامد استفاده کرد. در محیط کشت جامد امکان نگهداری میکروارگانیسم تا حدود شش ماه وجود خواهد داشت اما امکان نگهداری در محیط کشت مایع بسیار کمتر است.
۳-۶-۲-۱– محیط کشت مایع
محیط کشت با ترکیبات ذکر شده در جدول ۳-۳ در ارلن مایر تهیه گردید (شکل ۳-۳) و پس از بستن درب ظرف با بهره گرفتن از پنبه و تنظیف و پوشاندن آن با فویل آلومینیومی، درون اتوکلاو قرار داده شد. سپس در دمای ۱۲۱ درجه سانتی گراد به مدت ۲۰ دقیقه و پس از خنک شدن برای تلقیح آماده شد. برای تلقیح از سرنگ استریل استفاده گردید و به اندازه ۳ تا ۵ درصد حجمی از محیط کشت، مایه تلقیح به آن اضافه و در انکوباتور قرار داده شد.
جدول ۳-۳: ترکیبات محیط کشت مایع
نام ماده
غلظت (g/l)
گلوکز
۶
عصاره مخمر
۲
پپتون
۲
